Экономика стран

К сожалению, большинство людей, которые будут ими затронуты почти весь мир, не будут иметь никакого влияния на результат. Вести Экономика Дайджест иностранной прессы за 14 августа.
Вести Экономика Греции снова придется списывать долги Греция не сможет самостоятельно расплатиться по долгам, и понадобится новая реструктуризация долгов, чтобы спасти страну от банкротства.

Идентификация эндотелиальных клеток-предшественников в кавернозном теле у крыс

  1. Джун Сик Ли
  2. В Санг Хван
  3. Хён-Сук Ли
  4. Ми Ын Ким
  5. Янг Ву Сео
  6. Квангсунг Парк
  7. Аннотация
  8. 1. Введение
  9. 2. Материалы и методы
  10. 2.2. Иммуногистохимическое Окрашивание
  11. 2,3. Проточный цитометрический анализ
  12. 2,4. Статистика
  13. 3. Результаты
  14. 3.2. Локализация резидентных EPC в кавернозном теле
  15. 4. Дискуссия
  16. Подтверждение
  17. Конфликт интересов
  18. Рекомендации

Biomed Res Int. 2014; 2014: 910564.

, 1, 2, 2, 1, 3 и 2, *

Джун Сик Ли

1Кафедра биологии, исследовательская группа BK21-Plus по технологии биологически активного контроля, Колледж естественных наук, Университет Чосан, Кванджу 501-759, Республика Корея

В Санг Хван

2Департамент урологии и Центр творческих биомедицинских наук BK21 PLUS, Медицинская школа Национального университета Чоннам, Научно-исследовательский центр сексуальной медицины, Национальный университет Чоннам, 8 Хак-Донг, Донг-Гу, Кванджу 501-757, Республика Корея

Хён-Сук Ли

2Департамент урологии и Центр творческих биомедицинских наук BK21 PLUS, Медицинская школа Национального университета Чоннам, Научно-исследовательский центр сексуальной медицины, Национальный университет Чоннам, 8 Хак-Донг, Донг-Гу, Кванджу 501-757, Республика Корея

Ми Ын Ким

1Кафедра биологии, исследовательская группа BK21-Plus по технологии биологически активного контроля, Колледж естественных наук, Университет Чосан, Кванджу 501-759, Республика Корея

Янг Ву Сео

3 Корейский институт фундаментальных наук, Центр Кванджу, Кванджу 500-757, Республика Корея

Квангсунг Парк

2Департамент урологии и Центр творческих биомедицинских наук BK21 PLUS, Медицинская школа Национального университета Чоннам, Научно-исследовательский центр сексуальной медицины, Национальный университет Чоннам, 8 Хак-Донг, Донг-Гу, Кванджу 501-757, Республика Корея

1Кафедра биологии, исследовательская группа BK21-Plus по технологии биологически активного контроля, Колледж естественных наук, Университет Чосан, Кванджу 501-759, Республика Корея

2Департамент урологии и Центр творческих биомедицинских наук BK21 PLUS, Медицинская школа Национального университета Чоннам, Научно-исследовательский центр сексуальной медицины, Национальный университет Чоннам, 8 Хак-Донг, Донг-Гу, Кванджу 501-757, Республика Корея

3 Корейский институт фундаментальных наук, Центр Кванджу, Кванджу 500-757, Республика Корея

Академический редактор: Казем М. Азадзой

Получено 2014 г. 2 июля; Пересмотрен в 2014 году, 17 сентября; Принято в 2014 г. 22 сентября.

Это статья с открытым доступом, распространяемая по лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Аннотация

По-видимому, клетки-предшественники сосудистой стенки служат локальным резервуаром клеток для восстановления сосудов. Было выдвинуто предположение, что кавернозное тело может содержать эндотелиальные клетки-предшественники сосудистой стенки (EPC). В этом исследовании мы исследовали идентификацию и локализацию EPC в кавернозном теле в модели на крысах. Взрослых самцов крыс Sprague-Dawley использовали для выделения EPC из кавернозных тел. Чтобы проверить наличие и локализацию EPC, EPC-специфические маркеры (CD34, Flk-1 и VE-кадгерин) были оценены с помощью проточной цитометрии и конфокальной микроскопии. Маркеры EPC были в основном экспрессированы в кавернозном синусоидальном эндотелиальном пространстве. EPC-маркер-позитивные клетки составляли около 3,31% кавернозного тела нормальной крысы по данным анализа FACS. Как показано с помощью конфокальной микроскопии, в кавернозном теле присутствовали CD34 + / Flk-1 + и CD34 + / VE-кадгерин + -положительные клетки. Наши результаты показывают, что регуляция EPCs кавернозного тела может быть новой терапевтической стратегией в лечении эректильной дисфункции.

1. Введение

Эрекция полового члена сдерживается сосудистыми, нервными и гормональными факторами, а также структурной целостностью кавернозного канала. Эндотелий кавернозных клеток и клеток гладких мышц играют решающую роль в сосудистой гемодинамике во время эрекции полового члена. Эндотелиальный монослой играет ключевую роль в физиологии эрекции; следовательно, любое клеточное или молекулярное нарушение эндотелиальных клеток приводит к эректильной дисфункции [ 1 ]. Недавние исследования показали, что частота и развитие эректильной дисфункции тесно связаны с дисфункцией эндотелиальных клеток [ 2 ].

Эндотелиальные клетки-предшественники (EPC) играют главную роль в формировании новых сосудов. EPCs - это популяция редких клеток, которые циркулируют в крови со способностью дифференцироваться в эндотелиальные клетки и образуют слизистую оболочку кровеносных сосудов [ 3 ]. Кроме того, EPC могут пролиферировать и участвовать в васкулогенезе. Несколько отчетов показали, что количество циркулирующих EPCs снижается у пациентов с эректильной дисфункцией [ 4 , 5 ]. Недавно клетки-предшественники сосудистой стенки были введены в качестве источника для постнатального васкулогенеза [ 6 ]. Эти клетки-предшественники сосудистой стенки, по-видимому, служат локальным резервуаром клеток для васкулогенеза. Также сообщалось, что остеогенные клетки-предшественники человеческой белковой оболочки могут происходить из стволовых клеток [ 7 ]. Кроме того, Traish et al. предположил, что андрогенная депривация способствует дифференцировке клеток-предшественников стромы в линию адипоцитов [ 8 ].

Предполагалось, что кавернозное тело содержит EPC сосудистой стенки. Поэтому мы стремились идентифицировать и локализовать EPC в кавернозном теле на модели самцов крыс.

2. Материалы и методы

2.1. животные

Взрослые самцы крыс Sprague-Dawley (12 недель, n = 20) были использованы в текущем исследовании. Ткань полового члена собирали для биохимических анализов, как описано ниже. Это исследование было одобрено Комитетом по этике Медицинской школы Национального университета Чоннам.

2.2. Иммуногистохимическое Окрашивание

У крыс под кетаминовым наркозом кавернозное тело перфузировали холодным физиологическим раствором через брюшную аорту. Затем половой член был быстро удален и пещеристое тело было тщательно рассечено от уретры и окружающей соединительной ткани под оптическим увеличением. Средняя часть пещеристого тела была собрана для иммуногистохимической оценки. Образцы кавернозной ткани немедленно фиксировали 4% параформальдегидом в забуференном фосфатом солевом растворе (PBS; 137 мМ NaCl, 27 мМ KCl, 4,3 мМ Na2HPO4 и 1,4 мМ KH2PO4) и крио-встраивали. Внедренные ткани разрезали по вертикали, и образцы подвергали иммуногистохимическому обнаружению CD34, рецептора-2 фактора роста эндотелия сосудов (Flk-1, VEGFR-2) и VE-кадгерина. Для выявления CD34, Flk-1 и VE-кадгерина срезы ткани промывали PBS-T (0,1% Твин в PBS). После нескольких промывок PBS срезы тканей пронизывали 5% сывороткой осла, промывали 0,1% тритоном X-100 в PBS для подавления периферической неспецифической реактивности и затем инкубировали с первичными антителами против CD34 и против Flk-1 (Santa Cruz Biotechnology , Калифорния, США) в течение ночи при 4 ° С. После промывания в PBS-T срезы инкубировали в течение 2 часов с антителами, конъюгированными с флуоресценцией (Invitrogen, Калифорния, США), для анализа конфокальной микроскопии. Срезы с иммуноокрашенной тканью закрепляли водной постоянной установочной средой с DAPI и исследовали с помощью световой микроскопии и конфокальной микроскопии. Конфокальные изображения были получены с помощью лазерного конфокального сканирующего микроскопа (TCS SP5 / AOBS / Tandem, Leica, Германия) в Корейском институте фундаментальных наук, Центр Кванджу.

2,3. Проточный цитометрический анализ

Выделенные клетки из части каждого полового члена собирали, промывали PBS и ресуспендировали в промывочном буфере для флуоресцентного сортировщика клеток (FACS) (1% фетальной бычьей сыворотки и 0,1% азида натрия в PBS). Сначала клетки блокировали 0,5% (об. / Об.) Нормальной козьей сывороткой в ​​течение 15 мин при 4 ° С и окрашивали FITC-конъюгированными анти-CD34, PE-конъюгированными анти-Flk-1 и анти-VE-кадгериновыми антителами в течение 30 минут. мин при 4 ° С. Окрашенные клетки анализировали с использованием проточного цитометра FACSCalibur (Becton Dickinson, CA, USA).

2,4. Статистика

Все результаты выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение от указанного количества экспериментов. Статистическую значимость оценивали с использованием t- тестов, а различия сравнивали в отношении статистической значимости с помощью одностороннего ANOVA с последующим специальным тестом Бонферрони. Значение P 0,05 считалось значимым.

3. Результаты

3.1. Идентификация резидентных EPC в кавернозном теле

Мы оценили распределение EPC полового члена с помощью иммуноокрашивания и анализа FACS. Изолированные клетки полового члена окрашивали анти-CD34, анти-Flk-1 и анти-VE-кадгериновыми антителами для анализа проточной цитометрии. CD34 является маркером гемопоэтических стволовых клеток / клеток-предшественников, а Flk-1 и VE-кадгерин являются маркерами эндотелиальных клеток. Соответственно, клетки CD34 + / Flk-1 + и CD34 + / VE-кадгерин + указывают на EPC. Результаты показали, что EPC составляли приблизительно 3,31% (CD34 + / Flk-1 +) и 3,31% (CD34 + / VE-кадгерин +) от общей популяции половых клеток ().

Результаты показали, что EPC составляли приблизительно 3,31% (CD34 + / Flk-1 +) и 3,31% (CD34 + / VE-кадгерин +) от общей популяции половых клеток ()

Проточная цитометрический анализ экспрессии EPC-специфических маркеров в пещеристом теле крысы. Для определения наличия резидентных EPC в кавернозном теле крысы CD34 и Flk-1 использовали в качестве маркеров EPC, а двойные положительные клетки (EPC) измеряли с помощью проточной цитометрии. Как показано на рисунке, EPC составляли 3,31% (CD34 + / Flk-1 +) и 3,31% (CD34 + / VE-кадгерин +) кавернозного тела полового члена крысы. Результаты представляют четыре отдельных эксперимента. EPC: эндотелиальная прогениторная клетка. * Р <0,05 по сравнению с нормой.

3.2. Локализация резидентных EPC в кавернозном теле

Кроме того, локализация ЭПК была идентифицирована с помощью иммуногистохимии с антителами против CD34, против Flk-1 и против VE-кадгерина. Чтобы исключить циркулирующие ЭПК, мы удалили кровь путем перфузии физиологического раствора через брюшную аорту. Как показано на фигурах и, клетки CD34 / Flk-1 с двойной меткой и CD34 / VE-кадгерин с двойной меткой были локализованы в кавернозном синусоидальном эндотелиальном пространстве. Эти данные указывают на то, что резидентные EPC существуют в эндотелиальном слое кавернозного тела.

Эти данные указывают на то, что резидентные EPC существуют в эндотелиальном слое кавернозного тела

Двойная иммунофлуоресцентная детекция CD34, Flk-1 и VE-кадгерина в кавернозном теле крысы. Объединенные изображения представляют наложение окрашивания для каждого отдельного антигена. Двойные позитивные клетки CD34 / Flk-1 и CD34 / VE-кадгерин были локализованы в кавернозном синусоидальном эндотелиальном слое (стрелка). Иммунофлуоресцентные изображения были получены с помощью конфокальной микроскопии. Данные представляют три или более независимых эксперимента.

4. Дискуссия

В эректильной ткани эндотелий, выстилающий сосудистое русло и трабекулы в половом члене, играет критическую роль в эректильной функции [ 9 ]. EPC играют важную роль в регенерации сосудистого эндотелия и восстановлении эндотелиального повреждения в сосудистых руслах. Трейш и Галузиан сообщили, что предполагаемые EPC, выделенные из периферической крови человека, экспрессируют два антигена, CD43 и Flk-1 [ 9 ]. В настоящем исследовании мы использовали эти маркеры для проверки существования и локализации EPC в кавернозном теле у крыс.

Мы обнаружили, что EPCs составляют приблизительно 3,31% популяции половых клеток и присутствуют в пещеристых телах и Tunica albuginea. Двойные окрашенные EPC CD34 и Flk-1 были обнаружены в области кавернозного синусоидального эндотелия. EPC характеризуются как CD34 + гематопоэтические предшественники из популяций, которые экспрессируют CD34, CD133 и VE-кадгерин, а также маркеры Flk-1 [ 10 ], тогда как циркулирующие EPC экспрессируют различные маркеры и характеризуются как CD34 + / Flk-1 + / VE-кадгерин + [ 10 ]. CD34 и Flk-1 экспрессируются как в ранних EPC, так и в поздних EPC. Коэкспрессия CD34 и Flk-1 или CD34 и VE-кадгерина широко использовалась для обнаружения EPC [ 9 , 11 ]. В настоящем исследовании мы подтвердили присутствие в иммунореактивных EPC CD34 и Flk-1 или CD34 и VE-кадгерина в кавернозном теле с помощью проточной цитометрии. Klein et al. ранее сообщалось о существовании резидентных «боковых популяций» клеток, которые имеют фенотипические и функциональные свойства клеток-предшественников в среде туники взрослых мышей аорты [ 12 ]. Они обнаружили, что сосудистые клетки-предшественники составляют 6% нормальной артериальной стенки.

Зенгин и соавт. сообщили о существовании ЭПК в сосудистой стенке, локализованной между гладкой мышцей и адвентициальным слоем сосудистой стенки взрослого [ 6 , 9 ]. Они предположили, что эта сосудистая зона в сосудистой стенке может служить источником клеток-предшественников для постнатального васкулогенеза. Существование резидентных EPC также было определено в таких тканях, как сердце и желтое тело [ 1 - 3 ]. Образцы яичников, содержащие corpora lutea от взрослых коров, экспрессировали мРНК CD133, CD34 и Flk-1, а также двойные позитивные клетки CD34 и Flk-1 были обнаружены в среде стенки артериального сосуда. В текущем исследовании CD34 + / Flk-1 + и CD34 + / VE-кадгерин + дважды положительные клетки были локализованы в кавернозном синусоидальном эндотелиальном слое (рисунки и). В нормальной сосудистой стенке EPCs были идентифицированы в субэндотелиальном пространстве и сосудистой адвентиции вблизи оболочки туники [ 12 ].

Роль EPCs в постнатальной жизни постулируется как поддержание нормальной физиологии сосудов, а также способствует регенерации сосудов [ 13 ]. Присутствие EPC в кавернозном синусоидальном эндотелиальном слое может иметь потенциал для восстановления поврежденного эндотелия. Эндотелиальный монослой кавернозного тела играет существенную роль в сосудистой гемодинамике эрекции полового члена. Любые условия, которые изменяют эндотелиальную функцию, таким образом нарушая биологическую активность и функциональную целостность, влияют на эректильную функцию. Интенсивные исследования были проведены для выявления сосудистых факторов риска, которые нарушают эндотелиальную функцию полового члена и приводят к васкулогенной эректильной дисфункции [ 1 ]. Следовательно, стратегии лечения васкулогенной эректильной дисфункции были направлены на улучшение эндотелиальной функции пещеристого тела. Такие стратегии включают пероральные ингибиторы фосфодиэстеразы-5 и интракавернозное введение вазоактивных агентов [ 1 ].

В настоящем исследовании мы стремились идентифицировать и локализовать EPC в кавернозном теле на модели самца крысы. Таким образом, мы не исследовали функцию EPC, которые обладают свойствами, подобными стволовым клеткам, и зрелой эндотелиальной функцией. Необходимы дальнейшие исследования для изучения функциональных исследований изолированных эндотелиальных клеток-предшественников кавернозного тела.

Новые стратегии лечения включают терапевтический ангиогенез и терапию стволовыми клетками / генами для лечения эректильной дисфункции [ 14 ]. Были предприняты попытки ангиогенных факторов, таких как VEGF и bFGF, для восстановления нормальной функции сосудистой системы полового члена [ 14 , 15 ]. Обоснование состоит в том, что эти ангиогенные факторы могут заменить или восстановить поврежденные эндотелиальные клетки.

В заключение мы обнаружили существование EPCs в эндотелиальном слое пещеристого тела. Постулируется, что цитокины необходимы для процесса дифференцировки EPC в эндотелиальные клетки. Необходимы дальнейшие исследования для изучения регуляторных путей регенерации EPC различными факторами, включая кастрацию, тестостерон и факторы роста.

Подтверждение

Это исследование было поддержано Программой фундаментальных научных исследований через Национальный исследовательский фонд Кореи (NRF), финансируемый Министерством образования, науки и технологий (2011-0014275).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что нет конфликта интересов в отношении публикации этой статьи.

Рекомендации

1. Коста С., Вираг Р. Эндотелиально-эректильная дисфункция: существенное обновление. Журнал сексуальной медицины . 2009; 6 (9): 2390-2404. doi: 10.1111 / j.1743-6109.2009.01356.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 2. Рю Ж.-К., Джин Х.-Р., Инь Г.Н., Квон М.-Х., Сонг К.-М., Чой М.Дж., Пак Ж.-М., Дас Н.Д., Квон К. -D., Batbold D., Lee T., Gao ZL, Kim K.-W., Kim WJ, Suh J.-K. Эректильная дисфункция предшествует другим системным сосудистым заболеваниям из-за некомпетентных кавернозных эндотелиальных клеточно-клеточных соединений. Журнал урологии . 2013; 190 (2): 779–789. doi: 10.1016 / j.juro.2013.02.100. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 3. Зампетаки А., Киртон Дж. П., Сюй В. Восстановление сосудов эндотелиальными прогениторными клетками. Сердечно-сосудистые исследования . 2008; 78 (3): 413–421. doi: 10.1093 / cvr / cvn081. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 4. Foresta C., Caretta N., Lana A., Cabrelle A., Palù G., Ferlin A. Циркулирующие эндотелиальные прогениторные клетки у субъектов с эректильной дисфункцией. Международный журнал исследований импотенции . 2005; 17 (3): 288–290. doi: 10.1038 / sj.ijir.3901311. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 5. Эспозито К., Чотола М., Майорино М.И., Джулиано Ф., Авторорино Р., Де Сио М., Джаннини Е., Лензи А., Джульяно Д. Циркулирующие CD34 + KDR + эндотелиальные клетки-предшественники коррелируют с эректильной функцией и эндотелиальная функция у мужчин с избыточным весом. Журнал сексуальной медицины . 2009; 6 (1): 107-114. doi: 10.1111 / j.1743-6109.2008.01042.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 6. Зенгин Э., Чаладжур Ф., Гелинг У.М., Ито У.Д., Триде Х., Лауке Х., Вейль Дж., Райхеншпюрнер Х., Килич Н., Эргюн С. Эргун С. Резидентные клетки-предшественники сосудистой стенки: источник постнатального развития васкулогенез. Разработка . 2006; 133 (8): 1543–1551. doi: 10.1242 / dev.02315. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 7. Вернет Д., Нолацко Г., Кантини Л., Маги Т.Р., Цян А., Раджфер Дж., Гонсалес-Кадавид Н.Ф. Доказательства того, что остеогенные клетки-предшественники в белковой оболочке человека могут происходить из стволовых клеток: последствия для болезни пейрония , Биология репродукции . 2005; 73 (6): 1199–1210. doi: 10.1095 / biolreprod.105.041038. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 8. Трайш А.М., Тозелли П., Чон С.-Дж., Ким Н.Н. Накопление адипоцитов в пещеристом теле полового члена орхиэктомизированного кролика: потенциальный механизм вено-окклюзионной дисфункции при дефиците андрогенов. Журнал Андрологии . 2005; 26 (2): 242–248. [ PubMed ] [ Google ученый ] 9. Трайш А.М., Галузиан А. Андрогены модулируют эндотелиальную функцию и эндотелиальные клетки-предшественники в эректильной физиологии. Корейский журнал урологии . 2013; 54 (11): 721–731. doi: 10.4111 / kju.2013.54.11.721. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 10. Христов М., Вебер С. Эндотелиальные клетки-предшественники: характеристика, патофизиология и возможная клиническая значимость. Журнал клеточной и молекулярной медицины . 2004; 8 (4): 498-508. doi: 10.1111 / j.1582-4934.2004.tb00474.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 11. Schoen K., Hirschberg RM, Plendl J., Kaessmeyer S. Идентификация CD133-, CD34- и KDR-позитивных клеток в бычьем яичнике: новый сайт резидентных эндотелиальных клеток-предшественников сосудистой стенки. Клиническая гемореология и микроциркуляция . 2012; 52 (2-4): 67–84. doi: 10.3233 / CH-2012-1585. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 12. Клейн Д., Хон Х.-П., Клефф В., Тилки Д., Эргюн С. Стеновые клетки-резиденты сосудистой стенки. Гистология и гистопатология . 2010; 25 (5): 681–689. [ PubMed ] [ Google ученый ] 13. Psaltis PJ, Harbuzariu A., Delacroix S., Holroyd EW, Simari RD Резидентные клетки-предшественники сосудистых клеток различного происхождения, фенотипа и функции. Журнал сердечно-сосудистых трансляционных исследований . 2011; 4 (2): 161-176. doi: 10.1007 / s12265-010-9248-9. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 14. Лисиак Дж.Дж., Кавусси П.К., Эллати Р.Т., Стиерс В.Д., Приложение Б.Н. Ангиогенезотерапия для лечения эректильной дисфункции. Журнал сексуальной медицины . 2010; 7 (7): 2554-2563. doi: 10.1111 / j.1743-6109.2010.01830.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] 15. Лин С.-С., Синь З.-С., Ван З., Дэн С., Хуан Ю.-С., Лин Г., Лю Т.Ф. Лечение стволовыми клетками при эректильной дисфункции: критический обзор. Стволовые клетки и развитие . 2012; 21 (3): 343–351. doi: 10.1089 / scd.2011.0303. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google ученый ] Статьи от BioMed Research International предоставлены здесь любезно предоставленной Hindawi Limited

Навигация сайта
Реклама
Панель управления
Календарь новостей
Популярные новости
Размещение вечных ссылок на трастовых
Очевидными недостатками как раз и являются все предыдущие качества, которые при определенных условиях начинают не помогать, а вредить продвигаемому проекту. Например, если по каким-то причинам донорский

Чемоданы купить украина
Дорожный чемодан. . . Если вы любите путешествовать, то без этого дорожного аксессуара вам просто не обойтись, и к слову сказать, дорожный чемодан - это не просто вместилище для ваших вещей. Правильно

Дверь браво официальный сайт
Рассмотрим все отдельные моменты и элементы, на примере которых можно сделать обоснованный выбор качественной входной пластиковой двери. Надежность двери определяются прочностью ее рамы (коробки) и

Movement ICO
When you lend your money directly to a company — which is what you do when you invest in a bond that a corporation issues — you also receive interest. Bonds, as well as stocks (which are shares of ownership

Страховка без диагностической карты
Диагностическая карта – заменитель талона ТО. В ней содержаться результаты проверки технического состояния автомобиля. Получить ее можно в специализированных технических центрах, снаряженных щитами для

Свадебные салоны в туле каталог
Наши консультанты предложат вам свадебные платьица с узорчатыми вышитыми корсетами, с драпировкой и шлейфами, которые прибыльно подчеркнут ваш силуэт, деликатно скрыв недочеты. Восхитительны элегантные,

Samsung s821 ремонт
Стиральная машина Самсунг S821 во время стирки время от времени останавливается и начинают мигать индикаторы всех режимов, при всем этом повсевременно пылают индикаторы всех температур включая Bio 60.

Купить ключи steam дешево
                                                                                                    killing floor ключ steam безвозмездно стим ключи новые стим ключ для кс безвозмездно бьянка и стим

Размещение наружной рекламы в Ростове
Внешняя реклама – реклама, всераспространенная с внедрением щитов, щитов, строй сеток, перетяжек, электрических табло, проекционного и другого созданного для проекции рекламы на любые поверхности оборудования,

Каталог запчастей John Deere
Техника, предлагаемая компанией John Deere (Джон Дир) обширно известна и популярна как в нашей стране, так и в мире. Поддержание в рабочем состоянии техники просит повторяющегося технического Обслуживания

Информация
Экономика стран www.mp3area.ru © 2005-2016
При копировании материала, ссылка на сайт обязательна.